隨著(zhù)秋冬季的來(lái)臨，豬場(chǎng)腹瀉問(wèn)題也變得逐漸嚴重。引起豬群腹瀉的原因有很多種，除了飼養管理（欄舍潮濕、溫度變化和斷奶轉群等）和飼料原因導致的非傳染病因素外。還有寄生蟲(chóng)、細菌性和病毒性傳染病因素導致的豬群腹瀉。其中，絕大部分腹瀉問(wèn)題主要是由豬性腹瀉相關(guān)病毒感染引起，這個(gè)結論也可從各實(shí)驗室的腹瀉樣本檢測數據得到佐證。特別是2010 年以來(lái)由 PEDV變異株所致的仔豬腹瀉及2014年發(fā)現的致病性PDCoV，使我國養豬業(yè)面臨新的威脅和挑戰，如何利用實(shí)驗室檢測輔助手段防控秋冬季病毒性腹瀉是當前關(guān)注的熱點(diǎn)。

一、什么是豬病毒性腹瀉？

二、國內豬病毒性腹瀉流行情況

由于非瘟疫情壓力，養殖企業(yè)對于生物安全非常重視，認為各種洗消措施執行的非常到位，但是有些舉措可以很好的防控非瘟，不一定能防控得住病毒性腹瀉，與ASFV主要以接觸傳播不同，PEDV傳播速度更快，腹瀉豬只排毒量大，且PEDV可以通過(guò)氣溶膠的方式遠距離傳播，這也提示我們要關(guān)注不同病原的生物學(xué)特性。通過(guò)對國內不同省市公布的流行病學(xué)調查數據來(lái)看，豬病毒性腹瀉有一定的季節性，多以冬春季節多發(fā)，夏季也時(shí)有出現。以PEDV感染為主，呈普遍流行，2010年10月以后，國內發(fā)生了一系列大規模的PEDV疫情，造成了巨大的經(jīng)濟損失。這些暴發(fā)是由新出現的傳播力極強的非SINDEL毒株引起的，新生仔豬的死亡率達到50-100%。隨后也發(fā)現了新的SINDEL毒株，證明經(jīng)典毒株和原來(lái)疫苗保護不了的變異株在國內共同流行。

很多豬企對豬病毒性腹瀉的認知依然停留在PEDV上，對于其他腹瀉病毒缺少關(guān)注，但是近幾年的監測數據表明，其他病毒單獨或者混合感染引起性腹瀉病例也逐漸增加。PDCoV雖然出現時(shí)間較晚，但研究表明該病毒具有比PEDV更廣泛的組織嗜性，以及細胞的感染譜，有更大的人畜共患的潛在風(fēng)險，危害不容小覷，且該病還能和PEDV共同出現加重臨床癥狀，也應作為重點(diǎn)監測防控疫??；PoRV在部分地區流行，近年來(lái)感染率也在逐漸增加；TGEV致病性低于PEDV主要呈現散發(fā)流行態(tài)勢，但因臨床癥狀與PEDV有相似，易造成診斷的混淆，影響豬場(chǎng)防控策略的制定和執行。

目前豬群感染狀況不僅僅是單一病毒感染，很多豬群出現了二重甚至三重感染的情況，主要以與PEDV混合感染的方式出現，以PEDV/PoRV、PEDV/PDCoV、PEDV/TGEV和PEDV/PoRV/TGEV這幾種混感組合較多，當出現混合感染時(shí)，對豬群的致死性更強，也更難處理。由于RNA冠狀病毒的變異能力較強，病毒的基因組也在不斷發(fā)生著(zhù)變異，如TGEV發(fā)生突變，形成一種能夠感染呼吸道的新毒株P(guān)RCV。在歐洲出現了PEDV/TGEV致病性重組的變種毒株（豬腸道冠狀病毒，SeCoV），目前僅在德國意大利和斯洛文尼亞有報道，但其致病性、臨床危害以及交叉保護等更多細節信息尚不清楚。以上出現的種種變化，對病原的診斷和防治要求也越來(lái)越高，也給豬場(chǎng)生產(chǎn)帶來(lái)了巨大的壓力。

三、明日達科技豬病毒性腹瀉檢測方案及產(chǎn)品優(yōu)勢

明日達病毒性腹瀉防控方案

相對于病毒分離法、熒光抗體檢測、免疫組織化學(xué)法、常規RT-PCR檢測和膠體金檢測，多重RT-PCR方法有著(zhù)顯著(zhù)優(yōu)勢：① 敏感性非常高，可以做到半定量；② 能確診單一感染或混合感染, 達到診斷和鑒別的雙重目的;③ 比傳統檢測方法更快速、方便，更能貼近一線(xiàn)生產(chǎn)。

根據不同地區豬病毒性腹瀉流行狀況及客戶(hù)自身設備限制因素，我們?yōu)椴煌枨罂蛻?hù)提供不同的科學(xué)精準的檢測服務(wù)方案：

• 方案一、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒+ PDCoV單重RT-PCR試劑盒

• 方案二、PEDV/TGEV/PDCoV三重RT-PCR檢測試劑盒+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案三、PEDV+TGEV+PDCoV+PoRV單重RT-PCR試劑盒

• 方案四、可為大型客戶(hù)提供定制豬病毒性腹瀉RT-PCR試劑盒產(chǎn)品

產(chǎn)品優(yōu)勢

①  操作簡(jiǎn)單、多項目同步進(jìn)行

提供2種方案：

如果實(shí)驗室擁有4通道及以上PCR儀器，可以直接選擇腹瀉類(lèi)多重PCR產(chǎn)品進(jìn)行檢測

● 多重PCR產(chǎn)品：?jiǎn)慰卓勺龆鄠€(gè)病毒性腹瀉病原檢測項目

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例，擴增曲線(xiàn)如下圖（2）所示：

圖2、PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR擴增曲線(xiàn)

如果實(shí)驗室擁有4通道以下PCR儀器，可以選擇空間單重產(chǎn)品

● 多重PCR產(chǎn)品（空間單重）：由空間單重PCR產(chǎn)品形成多重優(yōu)勢。明日達產(chǎn)品多個(gè)檢測項目，運行程序全部一致。一臺儀器一個(gè)程序一次運行即可檢測多個(gè)疾??！

酶與PCR反應液為兩管設計（當前產(chǎn)品），減少因操作導致的誤差

即將推出一管式高度預混液，只需分裝加樣即可上機檢測，讓操作更簡(jiǎn)便，敬請期待！

擁有高活性反轉錄體系，10min即可完成反轉錄步驟，搭配明日達自主研發(fā)15min磁珠自動(dòng)化提取，從提取到檢測全流程僅需90min。

②  特異性強

明日達腹瀉類(lèi)試劑盒能夠特異性擴增PEDV、TGEV、PoRV以及PDCoV靶標，相互之間無(wú)交叉反應；同時(shí)對CSFV、PPRSV、PCV2等十幾種其他豬病無(wú)交叉反應。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例：

⑴ 用設定的多重RT-PCR反應條件對PEDV、TGEV和PoRV標準品進(jìn)行單獨或者兩兩混合檢測：

⑵ 用設定的多重RT-PCR反應條件對PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV標準品進(jìn)行檢測，結果如下圖（9）所示：

圖9、加入PEDV、TGEV、PoRV、PCV2、CSFV和PRRSV

③  敏感性和重復性好

將內部核酸質(zhì)控品稀釋到 100copies/μL， 10copies/μL， 1copies/μL，0.1copies/μL，共計 4 個(gè)梯度， 每個(gè)梯度做 24 個(gè)平行檢測， 計算每個(gè)梯度的檢出率，平均 Ct 值和變異系數（CV%）。

以PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR檢測試劑盒為例（表1）：

表1 敏感性和重復性實(shí)驗

從結果可知，PEDV/TGEV/PoRV三重RT-PCR最低檢測限為1copies/μL， 所有梯度的檢測CV%均在2%以下，說(shuō)明該產(chǎn)品具有良好的敏感性，特異性和穩定性。

結 語(yǔ)

隨著(zhù)腹瀉病毒自身不斷變異重組，致病因素也逐漸增多，豬場(chǎng)獸醫工作者對豬只的混合感染的認識不夠，沒(méi)有很好的鑒別手段，就有可能給腹瀉病的診治帶來(lái)誤導，錯過(guò)了診治的黃金期，給豬場(chǎng)帶來(lái)巨大經(jīng)濟損失。由于近幾年全行業(yè)養殖水平的提高，中大型甚至是小型豬企都樹(shù)立了疫病防控的先進(jìn)理念，也有的建立了能為自己豬場(chǎng)服務(wù)的高水平實(shí)驗室檢測體系，從而針對復雜的問(wèn)題，能夠迅速剝繭抽絲，找出主要問(wèn)題所在，從而將損失最小化。明日達科技提供的豬病毒性腹瀉多種RT-PCR解決方案操作上更便捷、方法精準科學(xué)、產(chǎn)品敏感性特異性好，可為更多豬場(chǎng)解決診斷難題。